SPRimagerII?分子相互作用芯片分析系統(tǒng)
SPRimager? II芯片分析系統(tǒng)是美***GWC公司專門為分析分子間相互作用而設(shè)計的儀器。該儀器利用等離子共振原理,采用矩陣排列的芯片對樣品進行分析,由于矩陣芯片在1-CM流動池中是暴露在相同的樣品中,完全消除了多通道分析系統(tǒng)中通道與通道之間的差異,而且可以同時采集矩陣芯片上所有探針的數(shù)據(jù)。
無需標(biāo)記物
SPRimager II采用表面等離子共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging, SPRi)的原理來檢測與芯片上的探針結(jié)合的分子,無需使用諸如熒光標(biāo)簽之類的標(biāo)記物。由于標(biāo)記分子涉及了對其結(jié)構(gòu)進行化學(xué)修飾,因此有可能會影響分子的功能,這對蛋白質(zhì)組學(xué)的研究來說是***個很大的問題。因此,采用無需標(biāo)記的系統(tǒng),如SPRimager? II 是對蛋白質(zhì)相互作用的功能分析優(yōu)先選擇的途徑。
SPRimagerII可以使您在采集數(shù)據(jù)的同時觀察芯片陣列的圖像,并同時繪出相互作用的過程。這樣就大大加快了方法的建立過程,使您能夠?qū)⒆⒁饬性跈z測過程中實驗的進展上來。由于該系統(tǒng)無需標(biāo)記,因此,也就無需再為熒光標(biāo)記的淬滅而擔(dān)憂。
用途廣泛
如果您有多種研究興趣,或者您的實驗方案需要改變,您會發(fā)現(xiàn)SPRimager? II的使用范圍寬廣,這對您是十分方便的。SPRimager II檢測分子間的作用,不涉及樣品的化學(xué)組成,因此該儀器用途十分廣泛:從抗體到抗生素、從細胞到細胞因子、從配基到凝集素、從寡核苷酸到寡聚糖、從毒素到轉(zhuǎn)錄因子、從蛋白質(zhì)到多肽、以及從核酸適體到酶原,SPRimager? II即可以用于您目前的研究,又可以滿足您未來的需求。以下是SPRimager? II的部分應(yīng)用領(lǐng)域:
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用
抗體-蛋白質(zhì)相互作用
抗體-抗原之間的親和力
DNA-DNA或DNA-蛋白質(zhì)的結(jié)合過程
轉(zhuǎn)錄因子與dsDNA序列的結(jié)合
抗體的表征
抗原決定基的定位
分子作用的可逆性…
此外,不要忘記對于蛋白質(zhì)組學(xué)而言,不僅僅局限于成對的相互作用。您可以通過SPRimager? II監(jiān)測多種循序的結(jié)合事件,分析配基依賴性結(jié)合和競爭性結(jié)合活性。已發(fā)表的文獻提供了***些使用這個系統(tǒng)完成的多種多樣的成功的范例。
靈活易用
用戶友好的SPRimager? II系統(tǒng)將您放在駕駛員的位置上,使得您可以選擇對研究***有利的實驗設(shè)計。您可以選擇GWC提供的任何***種應(yīng)用方法,或不斷增長的文獻中發(fā)表的方法,也可以建立自己的方法。您可以隨時通過我們的技術(shù)代表得到全方位的支持。
要得到SPR圖像,您可使用SPRchip?或SpotReady?芯片基板,通過自動點樣機或手工點樣方式制作芯片。用您實驗是現(xiàn)有的移液器就可以對SpotReadyTM芯片基板進行點樣了。GWC提供的所有芯片基板都是無右旋糖苷的,因此,您無需擔(dān)憂多聚物對目標(biāo)分子與芯片探針造成的非特異性干擾。
配套齊全
所有的SPRimager?II系統(tǒng)都包括了泵、流動池、軟件,配備電腦后即可使用。將這個系統(tǒng)安裝起來并順利地運行起來可能比您想象的還要簡單,您無需投入更多的資源來學(xué)習(xí)如何使用這套系統(tǒng),只需要在儀器安裝過程中接受簡單的培訓(xùn)就可以開始您的實驗了。
SPRimager?II 系統(tǒng)主要特點
圖像采集容量 ― 同時采集觀察區(qū)內(nèi)的所有圖像。高靈敏度的近紅外CCD攝像機配合高通量的采集鏡頭獲得高清晰度的圖像數(shù)據(jù)。
實時數(shù)據(jù)采集 ― 可以對圖像和曲線數(shù)據(jù)進行實時顯示并存儲備用。
分析物傳送泵 ― 已包括在系統(tǒng)的基本配置中??砂催B續(xù)流或靜息流模式采集數(shù)據(jù)。
偏振控制 ― 采集s-偏振光的響應(yīng)??梢灾苯訉⑵滢D(zhuǎn)換為絕對反射率值來比較不同實驗的結(jié)果,而無需設(shè)定隨意的相對測量單位。
入射光角度在40o – 70o可以調(diào)節(jié) ― 可以靈活地對不同類型的表面進行測定,可以采集液體及空氣中的SPR檢測數(shù)據(jù)。
操作波長為800 nm ― 為您提供了在1-CM直徑的流動池中測量靈敏度和分辨率***佳的平衡。也可以根據(jù)要求,GWC公司為用戶設(shè)定特定的波長。
SPRimager? II系統(tǒng)在分子相互作用芯片陣列分析中的優(yōu)勢
適用范圍廣
SPRimager? II系統(tǒng)能分析幾乎的所有生物分子的相互作用。已發(fā)表的案例包括分析抗體、抗原、抗菌素、核酸適體、配體、凝集素、寡核苷酸、蛋白質(zhì)、多肽、寡聚糖、毒素、轉(zhuǎn)錄因子等等。與多通道SPR分析系統(tǒng)不同的是SPRimager? II系統(tǒng)獨特的液體系統(tǒng)設(shè)計,使得人們可以監(jiān)測整個細胞及病毒體。例如,用蛋白質(zhì)配體陣列表征細胞受體特征。請參閱D Peelen, V Kodoyianni, J Lee, T Zhang, MR Shortreed, LM Smith2006年發(fā)表的論文:Specific capture of mammalian cells by cell surface receptor binding to ligand immobilized on gold thin films。J. Proteome Res. 5:1580-1585。
探針數(shù)量及點板格式有很大的空間供用戶選擇
多通道SPR系統(tǒng)多是在2至4通道中放置探針,因此,每次***多只能分析2至4個探針。即便是花費USD 750,000或更多的昂貴系統(tǒng)***次分析的探針***多也不超過20個。與其不同,SPRimager? II 系統(tǒng)采用的是開放式的工作平臺,使用者完全可以自行控制探針的數(shù)量及點板格式:
選擇用于快速手工點樣預(yù)制的SpotReadyTM芯片基板。
選擇SpotReadyTM芯片允許使用移液器手工點樣。
純金斑點(每個SpotReadyTM芯片有16或25個點)周圍涂有疏水層 — 使溶于水的探針形成1 – 2 微升的不連續(xù)小珠。
SpotReadyTM基板特別適用于快速的方法開發(fā)以及低密度的陣列。
SpotReadyTM芯片基板主要用于自動點樣操作及高密度陣列。
SpotReadyTM芯片基板具有均***的純金表面,可以用于各種陣列格式。
適用于針尖式點樣系統(tǒng)及壓電式點樣系統(tǒng)。
GWC提供的這種芯片基質(zhì)的適用性使你可以對從幾個到幾百個探針的陣列進行分析,并允許你而不是儀器來控制實驗設(shè)計。而且,無論是選用SpotReadyTM或SpotReadyTM芯片基板構(gòu)建陣列,你都不會受到儀器的限制。
得到更完整的信息
市面上多通道分析系統(tǒng)提供的實時數(shù)據(jù)對于常規(guī)使用是可以的。但是如果你想知道探針與分析物的作用過程發(fā)生了什么,你就需要得到原始數(shù)據(jù)。而目前市面上的SPR產(chǎn)品均不能提供這些信息。GWC的SPRimager? II平臺可以為你提供每次分析的原始數(shù)據(jù)。此外,由于SPRimager? II系統(tǒng)采集矩陣的實時圖像,因此可以向你提供發(fā)生在芯片矩陣上的實時變化。而這些變化是十分珍貴的肉眼可見的顯示。這***功能對于方法的建立和嚴格的實驗解釋都是不可缺少。
SPRimager? II系統(tǒng)通過儀器的高精度的視頻采集電路向控制電腦傳送CCD圖像。圖像數(shù)據(jù)通過V++分析軟件進行定量分析及圖像顯示。定量數(shù)據(jù)通過Excel進行實時繪圖并提供完整的原始數(shù)據(jù)。系統(tǒng)允許你自由地進行各種數(shù)據(jù)分析。
更嚴格
市面上的多通道系統(tǒng)分析的是相互獨立的平行通道中發(fā)生的作用。而在SPRimager? II陣列系統(tǒng)中,所有芯片陣列上的探針都是堡壘在完全相同的分析物溶液中,并且從每***個探針采集數(shù)據(jù)的時間都完全相同。芯片陣列包括了正負控制探針,所提供的實驗數(shù)據(jù)是***為嚴謹?shù)?— 完全不需要另行設(shè)立單獨的控制探針通道。如果***臺雙通道的系統(tǒng)要同時監(jiān)控正負控制物就沒有通道來處理實驗樣品了!
陣列模式除了實驗的嚴謹性之外,GWC的陣列芯片基板從不使用右旋糖苷或其它可能引起混亂的多聚物來固定探針。這些多聚物會通過物理的阻礙或其帶電的性質(zhì)來阻礙分析物分子接近探針分子,因此會導(dǎo)致對親和評估的錯誤信息。例如,在右圖所示的結(jié)合平衡實驗中,對于相同的分子,未使用右旋糖苷的結(jié)合比使用右旋糖苷的結(jié)合具有更好的親和結(jié)果。請參閱Subramanian等人2006年發(fā)表的論文:An improved surface plasmon resonance method for determining the molecular basis of the calcium-dependent interactions of ALG-2, Calcium Binding Proteins. 1:56-61。
SpotReady?芯片基板規(guī)格
項目SpotReady? 16SpotReady?25貨號SPR-1000-016SPR-1000-025每個芯片基本的金斑數(shù)1625斑點直徑1 mm0.7 mm建議點樣體積包裝0.5μL每包5片0.3μL每包5片
SPRimager? II系統(tǒng)相關(guān)資料(請點擊下列標(biāo)題):
1、SPR Imaging: Introduction (英文)
2、SPR Imaging Special Resolution (英文)
3、SPR Imaging Sensitivity (英文)