不同PCR儀的區(qū)別及運(yùn)用
簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,基本上它是利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。
***個(gè)基本的PCR須具備:
①要被復(fù)制的DNA模板 Template
②界定復(fù)制范圍兩端的引物Primers
③DNA聚合酶Taq. Polymearse
④合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水
目前常用的技術(shù),可以將***段基因復(fù)制為原來的***百億至***千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。
把***次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行***個(gè)特定退火溫度的PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是做簡單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科研研究,教學(xué),醫(yī)學(xué)臨床,檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
***次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置***系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段,其***適退火溫度是不同的,通過設(shè)置***系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而***次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的***適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。
原位PCR儀用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀,如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增,不但可以檢測(cè)到靶DNA,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價(jià)值。
在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加***個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當(dāng)只用***種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。該儀器主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè),生物醫(yī)藥研發(fā),食品行業(yè),科研院校等機(jī)構(gòu)。