分析檢測(cè)的細(xì)胞

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細(xì)胞接種或做其他實(shí)驗(yàn)之前的細(xì)胞換洗和濃縮過程中，離心和重懸是常用的方法。***般認(rèn)為CHO細(xì)胞是比較好生長(zhǎng)的，但有時(shí)它們也會(huì)有特別的生長(zhǎng)要求，需要專門的培養(yǎng)基才能很好地生長(zhǎng)。譬如，以下實(shí)驗(yàn)中的CHO細(xì)胞通過1000g離心5min后（相對(duì)溫和的離心），在培養(yǎng)基或PBS緩沖液中重懸，然后評(píng)估不同細(xì)胞制備條件對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析結(jié)果的影響。

結(jié)果顯示：在推薦的培養(yǎng)基中離心和重懸對(duì)這種CHO細(xì)胞沒有明顯的影響。但是在PBS緩沖液中重懸對(duì)這種CHO細(xì)胞活率的影響很大，和平均細(xì)胞直徑***樣都明顯變小。同時(shí)，細(xì)胞濃度也有***些降低，可能是在重懸過程中對(duì)細(xì)胞造成了損傷。在PBS中的第二次離心和重懸對(duì)該細(xì)胞活率和直徑繼續(xù)產(chǎn)生負(fù)面的影響。

EL4細(xì)胞通常被認(rèn)為是易碎的，而且即使在理想條件下生長(zhǎng)也比較緩慢，并且活率***般<70%。我們制備了EL4細(xì)胞后分裝到96孔板中。細(xì)胞類型使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞參數(shù)，只是混合次數(shù)有所差異。目的是評(píng)估增加混合后細(xì)胞受到混懸和離心破壞的影響有多大。

根據(jù)EL4細(xì)胞的測(cè)試結(jié)果（如上表所示）可以看到：總細(xì)胞計(jì)數(shù)，總細(xì)胞濃度和直徑都沒有怎么變化，而活細(xì)胞數(shù)隨混合次數(shù)增加逐漸下降，因而細(xì)胞活率也相應(yīng)下降。這表明對(duì)于這類細(xì)胞，減少吹打混懸和臺(tái)盼藍(lán)混合次數(shù)可能會(huì)更適合，過多的混勻吹打需要避免。

3.1 SF昆蟲細(xì)胞

即使在理想條件下SF9細(xì)胞生長(zhǎng)要達(dá)到高密度也不容易，通?；盥识荚?0%以下。因此96孔板測(cè)試導(dǎo)致儀器檢測(cè)總時(shí)間延長(zhǎng)，可能會(huì)對(duì)排在后面的待測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響。我們使用了標(biāo)準(zhǔn)昆蟲細(xì)胞的參數(shù)在96孔板上對(duì)SF9昆蟲細(xì)胞進(jìn)行了評(píng)估。

結(jié)果顯示在測(cè)試的3小時(shí)過程中，細(xì)胞活率沒有檢測(cè)到有大的影響，細(xì)胞直徑也沒有太大變化，但如果細(xì)胞死亡或膨脹，這兩個(gè)參數(shù)是會(huì)改變的。雖然活率較低，但在離開細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境后比較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)并沒有不利影響，所以這些細(xì)胞足夠強(qiáng)壯。

3.2 HELA細(xì)胞

讓HELA細(xì)胞生長(zhǎng)成高度融合狀態(tài)產(chǎn)生脅迫效應(yīng)，然后對(duì)細(xì)胞收集并重懸分散。再將細(xì)胞分裝到96孔板中，通過標(biāo)準(zhǔn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型測(cè)試得到分析結(jié)果。96孔板按每列的順序依次檢測(cè)，從而保證每行之間細(xì)胞檢測(cè)間隔時(shí)間是***致的。

注意到96孔板后面的樣品得到稍微更高的濃度。同時(shí)更多的研究發(fā)現(xiàn)，隨著時(shí)間的增加細(xì)胞的平均直徑會(huì)逐漸變大。

通過觀察得到的細(xì)胞圖像發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞數(shù)量的增加看上去是膨脹或氣泡，同時(shí)還伴有許多非細(xì)胞顆粒。雖然通過細(xì)胞分析參數(shù)設(shè)置，后者（非細(xì)胞顆粒）通常不會(huì)對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)產(chǎn)生影響，但它們可能被計(jì)數(shù)為小細(xì)胞。膨脹效應(yīng)導(dǎo)致在3小時(shí)的檢測(cè)時(shí)間中（96孔板）平均細(xì)胞直徑增加大概10%，而且可能導(dǎo)致低于***小直徑閾值的小細(xì)胞也被統(tǒng)計(jì)到計(jì)數(shù)結(jié)果中。