***、引言

在生物學和醫(yī)學研究中，免疫技術已經(jīng)成為***種重要的研究工具。其中，免疫沉淀（Immunoprecipitation）和免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是兩種常用的技術，它們在探索蛋白質相互作用、定位蛋白質復合物等方面發(fā)揮著至關重要的作用。本文將對這兩種技術的定義、應用、優(yōu)缺點以及常見問題進行解析。

免疫沉淀：免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來，初步分離靶蛋白的***種方法。它通常用于蛋白質的純化和富集，以便進行后續(xù)的分析，如蛋白質譜分析或Western blot。

免疫共沉淀：免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是***種用于檢測兩種或多種蛋白質之間相互作用的技術。當***種蛋白質與特異性抗體結合后，可以通過共沉淀的方式將與之相互作用的蛋白質***同沉淀下來。

三、應用

（1）免疫沉淀（IP）***般可用于以下的研究分析

1.磷酸化位點分析

2.激酶活性分析

3.乙酰化位點發(fā)現(xiàn)與鑒定

2）免疫共沉淀（Co-IP）***般可用于以下的研究分析

1.利用質譜鑒定相互作用蛋白

2.蛋白相互作用的驗證

3.缺失分析聯(lián)合co-IP進行蛋白互作結構域分析

4.測定兩種目標蛋白質是否在體內結合

5.確定***種特定蛋白質的新的作用搭檔

6.分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物

四、優(yōu)缺點

免疫沉淀：優(yōu)點在于特異性高，能夠有效地將目標蛋白與其他蛋白分離；缺點是需要大量的抗體和較長的實驗時間。

免疫共沉淀：優(yōu)點在于能夠直接檢測蛋白質間的相互作用，且操作相對簡單；缺點是可能會受到非特異性結合的干擾，導致結果出現(xiàn)偏差。

五、常見問題解析

（1）免疫共沉淀中的input是指什么？

input是陽性對照。免疫共沉淀實驗中，會直接取細胞裂解液進行WB，用于驗證細胞裂解液中確實存在目的蛋白，即陽性對照。

（2）如何避免重鏈，輕鏈的影響（點擊此鏈接詳述）?

設計合適的IP實驗；

選擇合適種屬的抗體；

選擇特異性識別重鏈/輕鏈的二抗。

（3）Input對照組出現(xiàn)假陰性結果？

裂解液過于劇烈，采用溫和的裂解條件；

選擇目的蛋白或相互作用蛋白含量低的樣品：過表達提高目的蛋白的含量，進行免疫共沉淀。

六、結論

總的來說，免疫沉淀和免疫共沉淀是兩種強大且常用的免疫技術，各自具有獨特的優(yōu)勢和局限性。了解這兩種技術有助于我們更準確地理解和應用它們。在未來，隨著生物技術的發(fā)展，這兩種技術也將會更加完善，為科學研究提供更多的可能性。

(文章來源于儀器網(wǎng))