染色多孔板，怎么拍才好看？
病毒噬斑實驗 (Plaque assay) 指的是用待測病毒感染宿主細胞后，在固體介質(zhì)的限制下，從***初感染的細胞中釋放的病毒只能向宿主細胞周邊擴展，經(jīng)過***段時間的增殖，感染病變細胞聚集的區(qū)域會形成空斑，即病毒噬斑。不同的生長條件，不同種類的病毒，其噬斑形態(tài)也有顯著差異。因此噬斑大小、分布，邊緣情況都可以提供有關(guān)病毒生長和毒力因素的有價值的信息。
其基本步驟為：
1
培養(yǎng)宿主細胞：在多孔板中培養(yǎng)宿主細胞，達到匯合度90%以上；
2
配制固體介質(zhì)/固體覆蓋層：固體介質(zhì)的配方多種多樣，常見配方包括，0.6%瓊脂糖，2%羧甲基纖維素 (CMC) 或2.4%膠體微晶纖維素 (avicel) 的水溶液，固體介質(zhì)使用前需高壓滅菌；
3
病毒感染：將不同稀釋倍數(shù)的病毒感染液與宿主細胞進行共培養(yǎng)，***段時間后棄去病毒感染液，加入固體介質(zhì)繼續(xù)培養(yǎng)；
4
固定，染色：先向孔板中加入10%甲醛溶液，固定后棄去甲醛溶液，再加入0.5%結(jié)晶紫染液染色，待染液充分滲透后，用清水洗去浮色；
5
拍照并分析：用成像設(shè)備對多孔板進行成像，對每孔的噬斑數(shù)進行計算，對相同稀釋倍數(shù)的復(fù)孔取平均值以計算病毒滴度，計算公式為：噬斑形成單位 (PFU/mL) =平均噬斑數(shù)/（病毒感染液稀釋倍數(shù)×病毒感染液體積 (mL) ）。
***先，從機器里拿出我們平時拍WB的黑色樣品盤和白色墊板，拍多孔板要用的是底部透明的這款透明樣品盤。將多孔板放置在樣品盤中間，將透明樣品盤推入IQ800的下層樣品倉，選擇Colorimetric模式中的OD measurement，點擊start進行拍攝就好啦。
圖1：從左到右依次為透明樣品盤、NP透鏡、NP透鏡導(dǎo)軌
(文章來源于儀器網(wǎng))
