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【液體吸光度測(cè)量】典型配置、硬件說明、軟件操作

2024-05-07 09:35:55

從紫外到近紅外再到更長(zhǎng)的波長(zhǎng),吸光度測(cè)量提供了有關(guān)物質(zhì)在所有狀態(tài)下的化學(xué)成分的有價(jià)值的信息。

吸光度測(cè)量?jī)?yōu)勢(shì):

  • 無損測(cè)量-除非你的樣品是光敏的,否則測(cè)量可以在不改變樣品的情況下重復(fù)進(jìn)行。

  • 定量結(jié)果-用吸光度測(cè)定溶液濃度。

  • 準(zhǔn)確性和重復(fù)性-使用適當(dāng)?shù)墓ぞ吆头椒ǎ舛瓤梢员涣炕?,具有很高的測(cè)量到測(cè)量的精度。

表1 典型系統(tǒng)配置▼

紫外/可見光波段
近紅外波段

光譜儀

Flame 系列,HR/Maya 系列,QE Pro
NIRQUEST,F(xiàn)lame-S-VIS-NIR
軟件
Oceanview 1.6.3
光源
HL-2000 系列

采樣部件

比色皿
石英比色皿CV-Q-10,***次性比色皿CVD-UV 或CVD-VIS

比色皿支架

CUV-UV,CUV-UV-10, CUV-VAR ,CUV-FL-DA

光纖
QP400-2-VIS-NIR,QP600-2-VIS-NIR

【HL -2000 光源介紹】

HL-2000 鹵鎢光源是***種多用途光源,使用范圍VIS-NIR (360 nm-2000 nm)。該光源內(nèi)置致冷風(fēng)扇,可以保證光源的穩(wěn)定性。HL-2000 鹵鎢光源配有內(nèi)嵌濾光片支架,支架的尺寸為25.4 mm2 或50.8 mm2,厚度為3mm。其中,HL-2000-FHSA 型號(hào)有手動(dòng)和TTL 快門, 用來控制光源的強(qiáng)弱。

光源的基本操作步驟:

  • 啟動(dòng)光源,預(yù)熱 10 分鐘,以達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài);

  • 光纖與光源連接后,可通過轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)光闌旋鈕控制光強(qiáng);

  • 如果用戶在實(shí)驗(yàn)操作中對(duì)光源的輸出光譜有特殊要求,可在插片凹槽處放置濾光片、衰減片等光學(xué)器件。


圖2 HL-2000-FHSA 光源實(shí)物圖

【比色皿介紹】 
海洋光學(xué)提供用于吸光度、透射率和熒光測(cè)量的各類比色皿。其中,石英比色皿適用于170-2700nm 的范圍,與酸性溶液的兼容性好,并且可以牢固的固定在支架上。經(jīng)過適當(dāng)?shù)淖o(hù)理和保養(yǎng),石英比色皿在無劃痕、裂紋和類似缺陷的情況下,可進(jìn)行有效再利用。同 時(shí),海洋光學(xué)也提供***次性比色皿,例如塑料材質(zhì)的CVD-UV 和 CVD-VIS。CVD-UV 比色皿的適用范圍為 220-900nm,而 CVD-VIS 比色皿的適用范圍為 350-900nm。這兩種型號(hào)的比色皿光程長(zhǎng) 1cm。***次性比色皿不能二次使用,以避免交叉污染的風(fēng)險(xiǎn) 。***次性比色皿具有較高的化學(xué)穩(wěn)定性,強(qiáng)酸和強(qiáng)堿環(huán)境都適用。

圖 3 ***次性比色皿

圖4 石英比色皿

【比色皿支架介紹】
CUV-UV 比色皿支架適用于 1cm 光程的比色皿,用于溶液的絕對(duì)吸光度測(cè)量。CUV-UV-10 比色皿支架適用于10cm 光程的比色皿,用于溶液和氣體的絕對(duì)吸光度的測(cè)量。這兩種比色皿支架均配置有兩個(gè)可調(diào)準(zhǔn)直透鏡,1/4"濾光片插槽和連通恒溫水源的內(nèi)置管道(采用對(duì)流方式加熱或冷卻底座和比色皿),都可以通過SMA 接頭的光纖分別連接光譜儀和光源。

圖 5 CUV-UV 比色皿支架

圖 6 CUV-UV-10 比色皿支架

CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架適用于 1cm 光程的比色皿, 配有四個(gè)石英準(zhǔn)直透鏡,每個(gè)準(zhǔn)直透鏡上配備SMA 光纖連接器;支架內(nèi)置濾光片狹縫,可在熒光測(cè)量中使用濾光片;此外,比色皿支架的底部有連通恒溫水源的內(nèi)置管道。當(dāng)與海洋光學(xué)的光譜儀和光源配套使用時(shí),CUV-ALL-UV 4-WAY 能夠用于吸光度、熒光、散射等光學(xué)性能的測(cè)量。

此外,海洋光學(xué)還提供 CUV-VAR 型可變光程的比色皿架,可調(diào)節(jié)光程范圍為 1-10cm, 內(nèi)置的準(zhǔn)直鏡固定在支架上,支架可在基座上滑動(dòng),CUV-VAR 適用于需改變光程的液體的吸光度測(cè)量。

圖7 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架

圖8 CUV-FL-DA 直連比色皿支架

圖9 CUV-VAR 可變光程比色皿架

圖10 CUV-QPOD 可控溫比色皿支架

下面我們以CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架為例,介紹比色皿支架的使用方法。
  • 將比色皿放置在CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架的夾具中,支架內(nèi)配有可調(diào)彈簧活塞,用來固定比色皿。比色皿支架有***個(gè)內(nèi)置的濾光片插槽,我們將連接光源的光纖引入靠近插槽***側(cè)的連接口??蓪V光片放置于插槽中,進(jìn)行吸光度測(cè)量。
  • 兩根光纖連接比色皿支架時(shí),若兩端呈現(xiàn) 90°,則用于測(cè)量樣品的熒光;若兩端呈 180°,則用于測(cè)量樣品的吸光度??筛鶕?jù)具體要求連接光纖與比色皿支架。
  • 比色皿支架的底部有隱藏管道,可連接外部水源,以控制比色皿內(nèi)樣品溫度。如下面實(shí)物圖所示,支架底座可見 3 個(gè)出/入水口,出/入水口前的白色旋鈕可拆卸,使用時(shí)請(qǐng)根據(jù)需求卸下。將通道口連接附件,附件的另***側(cè)連接水管,用戶可選擇兩進(jìn)***出或兩出***進(jìn)模式。需要注意的是,用戶需要將將出水口管道***側(cè)接入水泵。

圖11 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架實(shí)物圖

圖12 連接附件


02

硬件說明


搭建液體吸光度測(cè)量系統(tǒng),具體操作步驟如下:

1)使用***根光纖連接比色皿支架與光譜儀,另***根光纖連接比色皿支架與光源,注意兩端光纖呈 180°(如圖14 所示);

2) 通過USB 數(shù)據(jù)線連接光譜儀至PC 端;

3)用電源線連接光源和市電插座(注意選擇帶地線的***標(biāo)電源線和市電插座);

4) 打開光源,預(yù)熱***段時(shí)間后,在空比色皿中裝入純水,測(cè)量參考光譜;

5)切斷光路(此處不建議直接關(guān)閉光源,可通過遮擋光源來切斷光路),測(cè)量背景光譜;

6)恢復(fù)光路,將樣品裝入空比色皿,進(jìn)行樣品的吸光度測(cè)量。

圖13 裝有樣品的比色皿

圖 14 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架


圖15 遮光罩

圖 16 液體吸光度測(cè)量系統(tǒng)實(shí)物圖

圖17 Flame 光譜儀接口說明

注意:吸光度測(cè)量時(shí),遮光罩應(yīng)始終放置在樣品上方,排除環(huán)境光的干擾。


03

軟件操作


本部分介紹吸光度測(cè)量的軟件操作流程,具體操作步驟如下:

1)從歡迎界面或者點(diǎn)擊圖標(biāo)創(chuàng)建新的光譜應(yīng)用,在光譜應(yīng)用向?qū)е悬c(diǎn)擊吸光度向?qū)D標(biāo)。

2)出現(xiàn)“選擇濃度模型”窗口,點(diǎn)擊“僅吸光度”選項(xiàng),其他兩項(xiàng)見文檔***后的補(bǔ)充介紹。

  • 僅吸光度:測(cè)量液體或氣體樣品的吸光度。

  • 朗伯比爾定律:適用于測(cè)量未知濃度的樣品,在吸光度測(cè)量的基礎(chǔ)上,輸入樣品的消光系數(shù)和光程,利用朗伯比爾定律 ???? = ????cl,得到樣品的濃度。 

  • 從已知濃度的溶液校準(zhǔn):如果用戶已經(jīng)測(cè)得樣品在幾組不同濃度情況下的吸光度,輸入吸光度與濃度的數(shù)據(jù)后,軟件可將數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行曲線擬合。當(dāng)用戶再次測(cè)量未知濃度的同***樣品時(shí),軟件將根據(jù)樣品的吸光度和前期數(shù)據(jù)擬合 的曲線,計(jì)算得到樣品的濃度。

3)調(diào)整好硬件配置后,在軟件中設(shè)置數(shù)據(jù)采集參數(shù),包括積分時(shí)間(integration time)、平均次數(shù)(average)和滑動(dòng)平均(boxcar)。用戶可根據(jù)光源的強(qiáng)度,調(diào)節(jié)積分時(shí)間和平均次數(shù)等參數(shù),勾選 “暗噪聲校準(zhǔn)”和“非線性校準(zhǔn)”功能。注意參考 譜測(cè)量和樣品測(cè)量時(shí)的參數(shù)設(shè)置應(yīng)相同。設(shè)置完成,光譜將顯示在右側(cè)譜圖界 面,點(diǎn)擊“下***步”按鈕。 

各個(gè)參數(shù)詳細(xì)含義請(qǐng)參考軟件手冊(cè)或help菜單。或者復(fù)制打開下面鏈接: 
http://www.oceanoptics.cn/spectroscopy_glossary
下面是簡(jiǎn)單介紹:
  • 積分時(shí)間:積分時(shí)間是檢測(cè)器在將累積的電荷通過A/D轉(zhuǎn)換器加工之前,被允許收集光子的時(shí)間長(zhǎng)度。***小積分時(shí)間是設(shè)備支持的***短積分時(shí)間,它取決于檢測(cè)器讀出所有像素信息的快慢,積分時(shí)間 與數(shù)據(jù)傳輸速度是不同的概念。

  • 平均次數(shù):光譜被顯示到軟件里之前會(huì)采集多次,然后取平均。

  • 滑動(dòng)平均:平滑是***種可以應(yīng)用于光譜的空間平均。該過程通過平均相鄰像素點(diǎn)的值來消除噪聲,因此它會(huì)以犧牲光學(xué)分辨率為代價(jià)來提高信噪比??臻g平均在光譜相對(duì)平坦以及相近像元變化較小的情 況下使用是非常有效的,但由此產(chǎn)生是分辨率的損失會(huì)使得尖銳的光譜特征峰難以分辨。當(dāng)應(yīng)用空間 平均時(shí),信噪比會(huì)以像元平均的平方根為基數(shù)進(jìn)行提高。請(qǐng)注意,在海洋光學(xué)軟件中,平滑寬度的值 是指所有像元以中間為基準(zhǔn)靠左或靠右的像元和的平均數(shù)。平滑值是4實(shí)際上是將9個(gè)像元***起平均(4個(gè)靠左像元+1個(gè)中心像元+4個(gè)靠右像元),信噪比將以3為倍數(shù)增加。同樣的,平滑值是2(5個(gè) 像元)將使信噪比以2.2為倍數(shù)增加,平滑值是0(1個(gè)像元),信噪比以1為倍數(shù)增加(因此光譜不改 變)。

  • 暗噪聲校準(zhǔn):海洋光學(xué)的大部分光譜儀都有自帶的遮光像元。暗噪聲校準(zhǔn)會(huì)用當(dāng)前光譜讀數(shù)減去遮光 像元的讀書,以排除溫飄等系統(tǒng)性影響。

  • 非線性校準(zhǔn):光譜儀出廠前已完成。如無特殊需求,請(qǐng)默認(rèn)勾選。

  • 觸發(fā)模式:請(qǐng)參考海洋網(wǎng)站的相關(guān)文檔。如無特殊需求,可保持默認(rèn)設(shè)置不變。 

4)出現(xiàn)“保存參考光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標(biāo)保存參考光譜,再點(diǎn)擊“下***步”。

5)出現(xiàn)“保存背景光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標(biāo)按鈕,保存背景光譜。之后點(diǎn)擊“完成”按鈕完成設(shè)置。

6)在視圖窗口中,吸光度測(cè)量結(jié)果以兩張圖譜的形式顯示。如下圖所示,左側(cè)為吸光度圖譜,右側(cè)為光譜全譜,圖譜結(jié)果均實(shí)時(shí)更新。點(diǎn)擊 “以表格形式查看 結(jié)果”,即可查看圖譜的數(shù)據(jù)表,表中的數(shù)據(jù)可復(fù)制后粘貼到Excel 或 txt。

a) 暫停采譜,保存此時(shí)的光譜數(shù)據(jù)。OceanView 界面左上方工具欄中有運(yùn)行、單步采集以及暫停采集的快捷鍵。  

 : 單步采集光譜數(shù)據(jù),單次采集后停止,點(diǎn)擊運(yùn)行,可繼續(xù)采集。

(來源: