GB 5009.35-2023 《食品安全******標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》實(shí)施以來，推出了Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專用柱，為廣大客戶解決了在著色劑檢測(cè)上遇到的問題，備受客戶好評(píng)。
根據(jù)老師反饋，在測(cè)試茶葉中的合成著色劑時(shí)，采用GB 5009.35-2023的方法測(cè)試時(shí)，容易出現(xiàn)堵柱子，回收率不好的情況等，鑒于此，采用Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專用柱和CommaSil? C18色譜柱開發(fā)了茶葉基質(zhì)中的合成著色劑的測(cè)試方法。

1.1樣品提取
取1.0 g（精確至0.001 g）樣品于50 mL離心管中，加入25 mL50%乙醇水溶液，渦旋20min，10000rpm離心2 min，將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，再加入10mL 50%乙醇水溶液重復(fù)提取兩次，離心。合并三次提取液，用50%乙醇水溶液定容至50 mL，8000rpm離心5 min，準(zhǔn)確移取10 mL上清液于另***50 mL離心管中，加入2 mL甲酸，混勻，待凈化。
1.2試樣的凈化濃縮
先依次用6 mL甲醇和6 mL10%甲酸水活化Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專用柱（貨號(hào)：COPWAX6150,150 mg/6 mL,），流出液棄去。保持柱體濕潤，將待凈化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，棄去流出液。再依次用6 mL水和6 mL甲醇淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱。***后用6 mL 15%氨化甲醇洗脫，收集洗脫液于15 mL離心管中，于50 ℃下氮吹至近干（200μL左右）。用20mM乙酸銨-甲醇溶液(9:1，pH=9.0)定容至1 mL，渦旋5min，超聲溶解5min（保證充分溶解），10000rpm離心5min，過親水PTFE濾膜，上機(jī)分析。

1.3空白實(shí)驗(yàn)
1.3.1過程空白

取***支潔凈的50 mL具塞離心管，不稱取試樣，按照上述1.1和1.2進(jìn)行提取、凈化，濃縮，過膜上機(jī)測(cè)試。
1.3.2空白本底實(shí)驗(yàn)
稱取試樣1 g（精確至0.001 g）按照上述1.1和1.2進(jìn)行提取、凈化，濃縮，過膜上機(jī)測(cè)試。

分別精密移取11種著色劑混標(biāo)中間液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻線，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

儀器：ThermoFisher U3000液相色譜儀
色譜柱：CommaSil? (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流動(dòng)相：A：20 mmol/L乙酸銨溶液 B：甲醇
洗脫方式：梯度洗脫，見表1
流速：1 mL/min
柱溫：30 ℃
進(jìn)樣量：10 μL
檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器
檢測(cè)波長：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脫程序

4.1 加標(biāo)回收

表2 紅茶中11種合成著色劑加標(biāo)回收率

圖1 11種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/mL）液相色譜圖

圖2 紅茶本底液相色譜圖

圖3 加標(biāo)濃度為1.5mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著色劑液相色譜圖

圖4 加標(biāo)濃度為4.5mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著色劑液相色譜圖

圖5 加標(biāo)濃度為15 mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著色劑液相色譜圖

注意事項(xiàng)：
1.靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液臨用現(xiàn)配。
2.提取次數(shù)參考***標(biāo)，少量多次原則，濃度過大，需要增加提取次數(shù)。
3.過柱時(shí)，保持柱體濕潤，流速不宜過快，控制在1滴/秒。
4.50℃氮?dú)鉂饪s至近干，過干容易損失目標(biāo)物，復(fù)溶時(shí)不易完全溶解。
5.上機(jī)之前過濾所用的濾膜不得使用尼龍濾膜，因?yàn)槟猃埖幕瘜W(xué)成分是聚酰胺，會(huì)吸附合成著色劑，要用親水PTFE。
6.過濾膜前離心樣液，有助于過膜，避免過濾時(shí)出現(xiàn)堵的現(xiàn)象。