單克隆抗體是由單***B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均***、僅針對(duì)某***特定抗原表位的抗體。它通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，將具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，從根本上解決了在抗體制備中長(zhǎng)期存在的特異性和可重復(fù)性問題，可直接用于疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制的研究。

單克隆抗體制備流程：
（1）免疫動(dòng)物 
免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程。***般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。 
（2）細(xì)胞融合 
采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按***定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。 
（3）選擇性培養(yǎng) 
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，***般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細(xì)胞能增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。 
（4）雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 
在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定單克隆抗體的細(xì)胞，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，及時(shí)進(jìn)行凍存。

（5）單克隆抗體的制備 
單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法： 
①體內(nèi)誘生法  取Balb/c小鼠，***先腹腔注射0.5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得單克隆抗體。 
②體外培養(yǎng)法  將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來，新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)，提高了抗體的生產(chǎn)量。雜交瘤細(xì)胞融合后，要進(jìn)行篩選后才能使用。雜交瘤細(xì)胞分為兩次：***次是篩選出雜交瘤細(xì)胞；另***次是在初選的雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜***瘤細(xì)胞，這兩次篩選的方法和原理各不相同。

單克隆抗體的制備可應(yīng)用于以下生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)并具有醫(yī)用價(jià)值： 
（1）凝集實(shí)驗(yàn)：haemaglutination
（2）沉淀反應(yīng)：Precipitation  reaction
（3）ELISA 等免疫學(xué)檢測(cè) 
（4）親和層析：分離蛋白質(zhì) 
（5）免疫印記（western  blotting)
（6）免疫沉淀 
（7）BIAcore  biosensor:檢測(cè)Ab-Ag或與蛋白的親和力 
（8）放射免疫學(xué)方法檢測(cè)免疫復(fù)合物 
（9）磁珠分離細(xì)胞 
（10）流式細(xì)胞儀：用于細(xì)胞的分型和細(xì)胞分離 
（11）臨床疾病的診斷和治療