ELISA vs WB，怎么選？牢記這幾點
蛋白質(zhì)分析和鑒定方法***常用的就是ELISA和Western Blot（以下簡稱WB），那到底該選哪種呢？
ELISA簡單，還是WB簡單？
是不是二選***就可以了？
ELISA和WB都是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的原理，主要區(qū)別在于： ELISA對于抗原、抗體都能檢測 WB則主要檢測抗原 此外，了解這兩種方法的優(yōu)缺點，即可輕而易舉地解決如何選擇的問題。 ELISA 靈敏度高、應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，檢測樣本濃度可低至pg/ml，操作相對簡單，用于確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)的高效方法，亦可精確定量蛋白質(zhì)的濃度。 ELISA 具有包被、封閉、檢測、 結(jié)果讀取4個常規(guī)操作步驟，有直接、間接、夾心及競爭檢測4種主要類型。 ELISA直接、間接、夾心檢測示例 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線示例 ELISA的優(yōu)缺點 優(yōu)點：適合體液(血清、尿液等)、細(xì)胞上清樣本；靈敏度高，操作簡單、高效、快速（1-2h），需樣品量較少，可以同時進行多個樣本分析。另外，也可靈活地DIY 檢測試劑盒，即可降低成本，又解決了實驗需求；同時ELISA可搭配實驗室高通量或自動化設(shè)備，實現(xiàn)自動化操作。 缺點：實驗操作過程中，由于操作問題、樣品污染、使用低質(zhì)量試劑等原因，其特異性方面經(jīng)常受到影響，可能會產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果；此外試劑盒中的抗體組分須低溫運輸、儲存；ELISA無法提供有關(guān)目標(biāo)蛋白的質(zhì)量和豐度等其他信息。 Western Blot 是***種通過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體孵育、成像等步驟對目標(biāo)蛋白進行檢測的方法，操作流程相對復(fù)雜，用于識別和了解蛋白質(zhì)的***些特征元素、蛋白質(zhì)相互作用和修飾等，可提供目標(biāo)蛋白的詳細(xì)信息，如蛋白質(zhì)大小和豐度等，也常被用于ELISA和其他檢測方法結(jié)果的驗證，它可以有效地幫助排除假陽性或假陰性的結(jié)果。 Western Blot的優(yōu)缺點 優(yōu)點：適用于組織或細(xì)胞裂解液樣本；檢測結(jié)果簡單易懂；特異性高，能夠從多種蛋白質(zhì)中識別目標(biāo)蛋白；可提供目標(biāo)蛋白的分子量、表達豐度等信息；熒光Western Blot，可以在***個實驗中進行多重檢測，檢測多種蛋白質(zhì)。 缺點：傳統(tǒng)操作步驟繁瑣、耗時（1到2天），體系如果沒有優(yōu)化，容易出現(xiàn)信號衰減快、高背景等情況，導(dǎo)致不理想的檢測結(jié)果；同時檢測靶蛋白的數(shù)量受限于***抗和二抗的組合；通常被用作驗證方法。 使用iBright 成像系統(tǒng)捕獲的熒光Western Blot圖像示例 那到底怎么選呢，ELISA or Western Blot？ 若實驗?zāi)康氖切枰唵?、快速地確定蛋白質(zhì)是否存在，并需要得到精確濃度，ELISA是更好的選擇。 若實驗?zāi)康氖切枰玫礁嚓P(guān)于蛋白質(zhì)的信息，比如分子量、純度、蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)表達變化或翻譯后修飾等，則Western Blot更適合。 此外，Western Blot和ELISA檢測的結(jié)果也可相互印證。
(文章來源于儀器網(wǎng))
