凝膠滲透色譜的操作流程注意細(xì)節(jié)
凝膠滲透色譜是***種基于分子尺寸對聚合物進(jìn)行分離和分析的技術(shù),其使用流程主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:
1. 前期準(zhǔn)備
- 樣品溶解:選取合適的溶劑將樣品充分溶解。溶劑不僅要能溶解多種聚合物,還不能腐蝕儀器部件,并且要與檢測器相匹配。對于***些難溶的樣品,可以采用加熱、攪拌或超聲等方法輔助溶解。
- 樣品過濾:溶解后的樣品溶液需要用特定孔徑的濾膜進(jìn)行過濾,以去除其中的雜質(zhì)和不溶物,防止它們堵塞色譜柱或影響檢測結(jié)果。***般使用0.2μm或0.45μm的濾膜。
- 儀器預(yù)熱:打開凝膠滲透色譜儀的電源,啟動(dòng)泵系統(tǒng),讓流動(dòng)相在系統(tǒng)中循環(huán)***段時(shí)間,使儀器達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。同時(shí),檢查儀器的各個(gè)部件是否正常工作,如檢測器、進(jìn)樣器等。
2. 參數(shù)設(shè)置
- 流動(dòng)相選擇與流速設(shè)定:根據(jù)樣品的性質(zhì)和色譜柱的要求,選擇合適的流動(dòng)相。常見的流動(dòng)相有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。然后,設(shè)置合適的流動(dòng)相流速,***般在0.5-1.5ml/min之間。流速過快可能會(huì)影響分離效果,流速過慢則會(huì)延長分析時(shí)間。
- 柱溫設(shè)定:不同的樣品和色譜柱可能需要不同的柱溫。***般來說,溫度越高,分子的運(yùn)動(dòng)越快,分離速度也會(huì)越快,但同時(shí)也會(huì)影響分子與固定相之間的相互作用。因此,需要根據(jù)具體情況選擇合適的柱溫,通常在20-60℃之間。
- 檢測器參數(shù)設(shè)置:根據(jù)所使用的檢測器類型,設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)。例如,對于示差折光檢測器,需要設(shè)置靈敏度、衰減等參數(shù);對于紫外檢測器,需要設(shè)置檢測波長等參數(shù)。
3. 樣品進(jìn)樣
- 手動(dòng)進(jìn)樣:如果儀器配備手動(dòng)進(jìn)樣器,先將進(jìn)樣器的注射器吸取***定量的樣品溶液,***般為50-100μl,然后將注射器的針頭插入進(jìn)樣口,緩慢注入樣品溶液,注意要避免產(chǎn)生氣泡和漏液。
- 自動(dòng)進(jìn)樣:如果儀器配備自動(dòng)進(jìn)樣器,按照操作界面的提示,設(shè)置進(jìn)樣的體積、速度等參數(shù),然后將樣品溶液放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品盤中,儀器會(huì)自動(dòng)完成進(jìn)樣操作。
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